從提取蛋白質(zhì)自身角度考慮,,ripa裂解物破壞蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu),,即破壞蛋白質(zhì)分子的二級和三級結(jié)構(gòu),使抗原決定簇充分暴露,,有利于檢測,;
從試劑盒本身的角度考慮,以雙抗體夾心法為例,,提取的蛋白質(zhì)中含有ripa降解液,,放入裝在包里的平板中時,放入平板中的抗體也同樣會發(fā)生降解作用(如sds ),,其特異性
萃取目前一般采用冷凍等電-離子交換法,。 發(fā)酵液在等電罐中用冷凍鹽水緩慢攪拌冷卻降溫至5,用硫酸調(diào)節(jié)Ph為3.22 (等電點),; 沉淀8h后,,沉淀經(jīng)離心分離分離為粗谷氨酸; 母液和上層洗液調(diào)合后,,更換上離子交換樹脂,,用氨水洗脫。
引入前http(/10000.com) /上層清液回柱,,后http(/10000.com) /和作為洗脫液,,提高http(///10000.com) 緩慢加入純堿溶液中和至6.2~6.4,控制中和液濃度為相對密度1.17~1.18(21~2b),。
將中和液降溫至50以下,,加入適量硫化鈉溶液去除鐵; 然后用粗谷氨酸回6.2~6.4,,升溫至60,,加入粉末活性炭,攪拌30分鐘后送入壓濾機過濾,。
濾液經(jīng)顆?;钚蕴恐蚊撋玫匠吻逡?; 清液放入真空煮鍋在60~70蒸發(fā)濃縮至相對密度1.28(31.5084 ),加入0.3 )6~0.542mm晶種后,,繼續(xù)蒸發(fā)蒸發(fā)結(jié)晶,,其間需要熱水殺死結(jié)晶,補充一定量的清液,。
加入物料后,,經(jīng)培養(yǎng)槽,離心得到結(jié)晶味精,,母液或脫色后蒸發(fā)結(jié)晶,,精制收率可達理論量的92%。
也稱為速度,,具有離心分離,分離沉降系數(shù)比較接近的物質(zhì)的方法,;
原理:不同顆粒之間存在沉降系數(shù)差時,,一定離心力作用下顆粒分別以一定速度沉降,在密度梯度不同的區(qū)域形成區(qū)帶的方法,。
介質(zhì)的梯度應(yīng)預(yù)先形成,,介質(zhì)的最大密度應(yīng)小于所有樣品粒子的密度。 常用的是蔗糖,、甘油,;
濃度梯度液的配制采用梯度混合器,形成從噴嘴向管底逐級上升的密度梯度,。
密度離心法:液體離心時,,其密度隨轉(zhuǎn)軸距離增加。 堿基GC對雙鏈DN段密度高,,利用精密的密度梯度超速技術(shù),,可以使切割合適片段的不同DNA按密度大小分布。 并與某些放射性標(biāo)記的mRNA雜交檢測,,分離相應(yīng)基因,。
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