高效液相色譜儀(HPLC )應(yīng)用高效液相色譜原理,主要是分析高沸點(diǎn)難揮發(fā),、熱不穩(wěn)定,、分子量大的有機(jī)化合物的儀器設(shè)備。
由儲液器,、泵,、進(jìn)樣器、色譜柱,、檢測器,、記錄儀等幾部分組成,。
儲液池中的流動相通過高壓泵注入系統(tǒng),樣品溶液通過進(jìn)樣器進(jìn)入流動相,,通過流動相加載到色譜柱(固定相)內(nèi),。 由于試樣溶液中各http(/10001.com) /在兩相中具有不同的分配系數(shù),在兩相中相對運(yùn)動時(shí),,需要多次重復(fù)吸附解吸的分配過程,。 各,分離為一個(gè),,通過檢測器后,,樣品濃度被轉(zhuǎn)換為電信號發(fā)送到記錄儀,數(shù)據(jù)作為圖像打印
1 .色譜法,。 液相色譜儀所用試劑必須為色譜級。 此外,,使用前應(yīng)抽濾0.45um或0.22um微濾,,去除試劑中的微粒和其他雜質(zhì),以免溶劑中殘留的雜質(zhì)長時(shí)間積聚在色譜柱上,,降低色譜柱的效果和壽命,。
2 .粘度。 一般要求流動相的粘度小于2cp,,使用高粘度溶劑會導(dǎo)致柱壓升高,,不利于分離。 常用的低粘度溶劑有乙腈,、丙酮,、乙醇等。
3 .溶解性,。 溶劑對待測樣品,,必須具有適宜的極性和良好的選擇性,符合相似相容原則,,避免樣品在體系別是色譜柱上沉淀,,日積累積降低色譜柱效果。
4 .溶劑必須與檢測儀一致,。 請注意,,對于紫外吸收檢測器,,選擇比溶劑的紫外截止波長長的檢測器。 截止波長是指某一特定波長,、超過某一特定波長的紫外線,,紫外探測器對其幾乎沒有響應(yīng)或響應(yīng)很小。 差示檢測器為了達(dá)到最高靈敏度,,需要選擇與組分折射率差異較大的溶劑作為流動相,。
5 .緩沖鹽和PH值。 反相色譜分離弱酸(3pKa7 )或弱堿(7pKa8 )樣品時(shí),,通過調(diào)節(jié)流動相的pH值,,抑制樣品目標(biāo)物解離,增加目標(biāo)物在固定相中的殘留一般樣品溶液為酸性時(shí),,在流動相中加入少量甲酸,、乙酸或磷酸以提高液相分離度,改善峰形,,但必須注意流動相的PH在色譜柱耐酸堿范圍內(nèi),。 樣品溶液呈堿性時(shí)則相反。 可以根據(jù)目標(biāo)產(chǎn)物的pKa確定pH,,根據(jù)pH選擇緩沖鹽的種類,。 常用的緩沖鹽溶液有醋酸銨、磷酸鹽,、三乙胺等,。
3-@ .com 安捷倫液 /未準(zhǔn)備好時(shí),常常出現(xiàn)表示未準(zhǔn)備好的現(xiàn)象,,這意味著儀器目前不能用于實(shí)驗(yàn)分析,。 此時(shí),需要檢查機(jī)器的電源是否正常連接,,機(jī)器和電腦是否正常連接,,軟件是否正確安裝,機(jī)器和外部環(huán)境的溫度是否在正常允許范圍內(nèi),。 只有滿足了各項(xiàng)條件,,安捷倫液 /才能正常運(yùn)行。 如果安捷倫液 /尚未準(zhǔn)備好,,技術(shù)人員可能需要檢查或重新調(diào)整以確保設(shè)備正常運(yùn)行,。
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